Eksozomları Ayırmak İçin Kromatografik Kolon (Hücre Süpernatanı)

 

Ürün Adı	Kedi. HAYIR.	Özel.
Eksozomları Ayırmak için Kromatografik Sütun (Hücre Süpernatanı)	G4113-5	5 adet

 

 

Eksozomlar, hücreler tarafından hücre dışı boşluğa aktif olarak salgılanan, tek biçimli boyuta ve 30 - 150 nm parçacık boyutuna sahip nano ölçekli membranöz keseciklerdir. Bu veziküllerin kendine özgü belirteçleri vardır ve proteinler, mRNA, miRNA, lipitler ve hücreler arasındaki madde ve sinyal iletişimi için bir yol olarak kullanılabilen ve hücre büyümesi, hücre çoğalması, hücre çoğalması gibi işlemlere katılabilen diğer maddelerle kaplıdır. hücre farklılaşması, hücre göçü, anjiyogenez ve tümör büyümesi.

Bu ürün, eksozomların hücre süpernatanlarından hızla ayrılması ve saflaştırılması için uygun bir boyut dışlama kromatografi kolonudur (SEC). Bu ürün, hücre süpernatan eksozomlarını ayırmak ve zenginleştirmek için bir hücre süpernatan konsantrasyon ajanı kullanır ve daha sonra konsantre eksozomları saflaştırmak için bir hücre dışı kesecik ayırma kromatografi kolonu kullanır. Bu sadece yüksek saflıkta ve yüksek aktiviteye sahip eksozomları korumakla kalmaz, aynı zamanda proteinleri de verimli bir şekilde uzaklaştırabilir; Ultra yüksek hızlı santrifüjleme yönteminde ultra yüksek merkezkaç kuvvetinin neden olduğu hücre dışı membran yapısına verilen hasarı etkili bir şekilde önlemek ve geleneksel çöktürme yöntemlerinde yüksek konsantrasyonlu proteinlerin ve diğer maddelerin eksozomların saflığı üzerindeki etkisini azaltmak.

 

 

Oda sıcaklığında taşıma; 12 ay geçerlilik süresi ile oda sıcaklığında saklayın.

 

 

Bileşen Numarası	Bileşen	G4113-5
G4113-1	Eksozomları Ayırmak için Kromatografik Sütun (Hücre Süpernatanı)	5 adet
G4113-2	Hücre süpernatanı konsantresi	250mL
Ürün Kılavuzu		1 adet

 

 

1. Hücre süpernatan konsantrasyonu

a) Hücre süpernatanının biyolojik numuneleri 0,22 μM filtre membranı ile filtrelenir ve kullanım için ön saflaştırma yapılır;

b) Hücre süpernatan biyolojik numunesi ile hücre süpernatan konsantresini eşit hacimde karıştırın, 15 saniye kuvvetlice çalkalayın ve 4 derece buzdolabında 2 saat bekletin;

c) Karışımı 60 dakika boyunca 10000 x g'de 4 derecede bir santrifüje yerleştirin; Süpernatantı atın;

d) Tamamen yeniden süspansiyonlu santrifüj çökelmesine %5 hacimde hücre süpernatanı biyolojik örneğinden oluşan 1 x PBS tamponu eklenir;

e) Ağır süspansiyon, sonraki deneyler için kullanılabilen veya yedekleme için -80 derecede dondurulabilen eksozomlar açısından zengindir.

2. Eksozomların saflaştırılması için hazırlık

a) PBS gibi oda sıcaklığında steril bir tampon çözeltisi hazırlayın (G4202 önerilir);

b) oda sıcaklığında, steril 0.1M NaOH reaktifini ve %20 etanolü hazırlayın;

c) Ayırma sütununu kullanmadan önce, ayırma sütununun kırmızı üst kapağını çıkarın ve kullanım için bir braketin (G6063 önerilir) üzerine yerleştirin;

3. Eksozomların ayrılması

a) Daha sonra kullanılmak üzere hücre süpernatan konsantresinin konsantrasyonu ve yeniden süspansiyonundan sonra eksozom numuneleri hazırlayın;

b) Ayırma sütununun beyaz alt kapağını çıkarın ve sütunun içindeki koruyucu sıvı dışarı aktıktan sonra, ayırma sütununu temizlemek için toplam 30 mL'lik tampon çözeltiyi gruplar halinde ekleyin;

c) Elek plakasının üzerindeki tüm tampon ayırma kolonuna girdikten sonra; Adım 3.a)'daki yedek eksozom örneğinden {{0}},5 mL'yi alın ve elek plakasının ortasına ekleyin (0,5 mL'den azsa, yapmak için tampon çözeltisi ekleyin) 0,5 mL'ye kadar);

d) Tüm eksozom numuneleri elek plakasından geçip ayırma kolonuna girdikten sonra 2,5 mL tampon solüsyonu ekleyin;

e) Önceki adımdaki tüm tampon çözeltisi elek plakasından geçip ayırma sütununa girdikten sonra, 1 mL tampon çözeltisi ekleyin ve aynı zamanda doğal olarak aktif eksozomlar açısından zengin olan 1 mL yıkama çözeltisini toplayın; Sonraki deneyler için uygulanabilir veya yedekleme için -80 derecede dondurulabilir;

4. Ayrışma sonrası tedavi

a) Eksozomların ayrılmasını tamamladıktan sonra, ayırma sütununu temizlemek için gruplar halinde toplam 30 mL tampon çözeltisi ekleyin;

b) Eksozomları hücre süpernatanından ayırmak için ayırma sütununu kullanmaya devam etmek gerekiyorsa, 3.c) ila 3.e); adımlarını tekrarlayın.

c) Eksozomları hücre süpernatanından ayırmak için ayırma sütununu kullanmaya devam etmek gerekli değilse, ayırma sütununu temizlemek için önce 5 mL 0,1M NaOH ekleyin, ardından toplam 20 mL tampon çözeltisi ekleyin Ayırma sütununu temizlemek ve dengelemek için gruplar halinde karıştırın ve ardından ayırma sütununu temizlemek için 5 mL %20 etanol ekleyin. Temizledikten sonra ayırma kolonunun beyaz alt kapağını kapatın; Son olarak, nemlendirmek için 2 mL %20 etanol ekleyin, ayırma sütununun kırmızı üst kısmını örtüp sıkılaştırın ve ayırma sütununu oda sıcaklığında saklayın.

 

 

1. Bu ürünü kullanarak eksozomları farklı hücre süpernatanlarından ayırırken, elüsyon eğrisi ve saflık biraz farklılık gösterir ancak genel eğilimi etkilemez.

2. Hücre süpernatan eksozomlarını bu üründen ayırma işlemi sırasında, ayırma kolonundaki sıvı akışının uzun süreli kesintisinden kaçınmak gerekir.

3. Bu ürünün kullanımı sırasında, aynı kolon üzerinde farklı kaynaklardan alınan biyolojik numuneleri ayırmayın ve aynı kolonu 5 defadan fazla tekrar kullanmayın.

4. Bu ürün oda sıcaklığında saklanmaya ve kullanıma uygundur ve düşük sıcaklıkta kullanımdan ve yüksek sıcaklıkta ısıtmadan kaçınılmalıdır.

5. Deney sırasında, kontaminasyonu önlemek ve güvenliği sağlamak için lütfen laboratuvar kıyafetleri ve tek kullanımlık eldivenler giyin.

 

Yalnızca Araştırma Kullanımı İçindir!

 

 

Popüler Etiketler: Eksozomları (hücre süpernatanını) ayırmak için kromatografik sütun, Eksozomları (hücre süpernatanını) ayırmak için Çin kromatografik sütunu üreticiler, tedarikçiler, fabrika