Tek Adımda Hızlı Mikoplazma Tespit Kiti (İzotermal Amplifikasyon Yöntemi)

Kit, hücre kültürü ortamındaki sekiz çeşit mikoplazmayı izotermal amplifikasyon tekniği ve görsel renk değişimi ile hızlı bir şekilde tespit edebilir. DNA ekstraksiyonu yapılmadan, 1 μL hücre kültürü süpernatantı doğrudan reaksiyon çözeltisine eklendi ve 65 derecede 30 dakika reaksiyona sokuldu. Pozitif numunenin rengi sarıdan kırmızıya dönüştü ve tüm süreç, aerosolün neden olduğu çapraz kontaminasyonu etkili bir şekilde önleyebilen PCR cihazına veya elektroforez için kapağın açılmasına ihtiyaç duymaz. Geleneksel PCR yöntemiyle karşılaştırıldığında bu ürün, basit işlem, yüksek hassasiyet gibi avantajlara sahiptir ve kültür ortamındaki çeşitli PCR inhibitörlerini tolere edebilir, bu nedenle yanlış negatif bir olgu yoktur ve tespit sonuçları qPCR ile oldukça tutarlıdır.

Islak buzla gönderilir ve -20 derecede saklanır; 12 aya kadar geçerlidir.

a:Kromojenik ajanlar içerir.

Başlamadan önce (lütfen dikkatlice okuyunuz)

Önceden 65 derecelik su banyosu veya metal ısıtma bloğu kurun.

1. Test edilecek numune hazırlama:

A. Yapışkan hücreler: Süpernatantı doğrudan emdirin. Hücre aşılama veya sıvı değişiminin 3 günden fazla olduğu ve birleşme derecesinin %90 civarında olduğu durumlarda numune alınması önerilmektedir. Bu sırada süpernatanttaki mikoplazma içeriği yüksektir ve kolayca tespit edilebilir.

B. Süspansiyon hücreleri: Süpernatan, 5 dakika süreyle 1,000 rpm'de santrifüjleme sonrasında elde edildi. Örneklerin, hücre kültürü ortamındaki mikoplazma içeriğinin yüksek olduğu ve kolayca tespit edilebildiği durumlarda, hücre aşılaması veya 3 günden fazla sıvı değişimi sonrasında alınması önerilmektedir.

2. Reaksiyon sistemi

a: Mycored Buffer çözüldükten sonra baş aşağı kullanılır.

b: Yukarıdaki reaksiyon sistemi hazırlandıktan sonra numune sayısına göre reaksiyon tüpüne alt paketleyin, 20 μL Parafin Yağı ekleyin ve ardından bir sonraki adıma geçin.

3. Örnekleri ekleyin

A. Negatif kontrol: Birinci reaksiyon tüpüne negatif kontrol olarak hiçbir numune eklenmedi.

B. Pozitif kontrol: Son reaksiyon tüpüne pozitif kontrol olarak 1 μL Pozitif Kontrol eklendi.

C. Test edilecek örnek: Reaksiyon tüpünün geri kalanına 1 μL hücre kültürü süpernatantı ekleyin.

a: Numune eklemek için lütfen pipet uçlarının başını parafin yağının sıvı seviyesinin altına uzatın.

4. Reaksiyon koşulu

Reaksiyon tüpünü önceden ısıtılmış 65 derecelik bir su banyosuna veya metal banyosuna aktararak 30 dakika inkübe edin. Renk gelişimi belirgin değilse reaksiyon süresi 40 dakikaya kadar uzatılabilir.

Reaksiyonun bitiminden hemen sonra reaksiyon tüpünü çıkarın ve reaksiyon solüsyonu oda sıcaklığına getirildikten sonra hala sarı ise sonuç negatif olacaktır. Reaksiyon çözeltisi kırmızıya dönerse sonuç pozitiftir. Reaksiyon tüpü açılmamalıdır, aksi takdirde kolayca aerosol kirliliğine yol açacaktır.

1. Reaksiyon bittikten sonra reaksiyon tüpünü açmayın.

2. Reaksiyon solüsyonu hazırlama sürecinde filtre elemanlı pipet uçlarının kullanılması, atılan pipet uçları ve reaksiyon tüpünün kendinden contalı torbaya konularak zamanında müdahale edilmesi önerilir.

3. Test tezgahını ve pipeti sık sık silmek için lütfen nükleik asit temizleyiciyi (G3020 önerilir) kullanın.

Yalnızca Araştırma Kullanımı İçindir!

Popüler Etiketler: tek adımlı hızlı mikoplazma tespit kiti (izotermal amplifikasyon yöntemi), Çin tek adımlı hızlı mikoplazma tespit kiti (izotermal amplifikasyon yöntemi) üreticiler, tedarikçiler, fabrika