İmmün Boyayıcı Antikor Eluenti

 

Ürün Adı	Kedi. HAYIR.	Özel..
İmmün Boyayıcı Antikor Eluenti	G1266	30 ml

 

 

Bu ürün, doku ve hücrelerin immünofloresan (IF), immünohistokimya (IHC) ve immünositokimya (ICC) immün boyaması sırasında birincil ve ikincil antikorların elüsyonu için kullanılır. Bu İmmünoboyama antikor elüenti, basit işlem, yumuşak koşullar ve güçlü elüsyon etkisi avantajlarına sahiptir. Numunenin morfolojisine ve yapısına zarar vermeden birincil ve ikincil antikorları tamamen elüte edebilir. Beyin, kemik, deri, aort kapakçığı vb.nin parafin bölümleri, dondurulmuş bölümleri, hücre slaytları, hücre yayması vb. TSA immünofloresan çoklu etiket deneyinde antikor elüsyonu için özellikle uygundur. Kovalent olmayan şekilde bağlı birincil antikor ve hedef protein, ikinci antikor ve birincil antikor kesildi ve sonraki antikor etiketlemesi üzerindeki etkiyi ortadan kaldırmak için elüte edildi.

 

 

2~8 derece depolama ve taşıma, 6 ay geçerlidir.

 

 

Bileşen Numarası	Bileşen	G1266-30 mL
G1266	İmmün boyama antikor elüenti	30 ml
Manuel		1 adet

 

 

Bu ürün kullanıma hazırdır ve seyreltme gerektirmez. Kullanmadan önce, antikor eluentini buzdolabından çıkarın ve numuneyi kaplamak için az miktarda antikor eluenti eklemeden önce oda sıcaklığına getirin, oda sıcaklığında 5 dakika inkübe edin, ardından eluenti atın, dokuyu tamamen kaplamak için yeterli eluenti tekrar ekleyin , 37 derecede 30 dakika inkübe edin, slaytı TBST'ye yerleştirin ve her seferinde 5 dakika olmak üzere 3 kez çalkalama masasında yıkayın.

Antikor eluentinin uygulanması, parafin kesitlerinde TSA floresan çoklu etiketleme örneğiyle ayrıntılı olarak açıklanmaktadır:

1. Doku kesitleri suya mumdan arındırıldı: Sırayla, kesitler 10 dakika süreyle Çevre dostu mum giderme solüsyonu I'e (G1128) konuldu - Çevre dostu mum giderme solüsyonu II (G1128) 10 dakika süreyle - Çevre dostu mum giderme solüsyonu III (G1128) ) 10 dakika süreyle - susuz etanol Ⅰ 5 dakika süreyle - susuz etanol Ⅱ 5 dakika süreyle - 5 dakika boyunca susuz etanol Ⅲ - ve damıtılmış su ile yıkandı;

2. Antijen onarımı: Doku tipine ve antikor tipine göre karşılık gelen antijen onarım çözümünü seçin (G1219,pH6.0; G1207,pH8.0; G1218,pH9 .0) ve antijen onarımı için onarım modu. Genel onarım yöntemi, antijen onarım cihazı (Servicebio'nun gelecek ürünleri), mikrodalga, yüksek basınç ve diğer yüksek sıcaklıkta onarımlardır. Bu işlem sırasında tamir solüsyonunun aşırı buharlaşması engellenmeli ve kurutulmamalıdır. Doğal soğutmanın ardından slayt PBS (G2156) içerisine yerleştirildi ve sarkaç masasında (SYC-Z100) her seferinde 5 dakika olmak üzere 3 kez çalkalanarak yıkandı.

3. Pap Pen ile daire çizin ve hidrojen peroksit ile kapatın: Kesitler hafifçe kuruduktan sonra, genellikle dokulardan yaklaşık 3 mm uzakta olan bir Pap kalemi (G6100) ile dokuların etrafına daireler çizin. Daireler tamamlandıktan sonra, daireler kuruduktan sonra saf su (G4701) veya PBS (G2156) ile yıkayın ve ardından endojen peroksidazı bloke etmek için bölümleri %3 hidrojen peroksit çözeltisine koyun ve oda sıcaklığında 25 dakika inkübe edin. . Kapandıktan sonra slayt PBS (G2156) içerisine yerleştirildi ve sarkaçlı masa (SYC-Z100) üzerinde 3 kez, her seferinde 5 dakika olmak üzere çalkalanarak yıkandı.

4. Serum bloklama: Kesit hafifçe kuruduktan sonra dokuya %3 BSA veya serum eklenir ve oda sıcaklığında 30 dakika süreyle kapatılır ve bloklama reaktifi, birincil ve ikincil antikor türlerine göre belirlenir.

5. İlk birincil antikoru ekleyin: Sızdırmazlık solüsyonunu yavaşça çalkalayın, birincil antikoru dilime belirli bir oranda ekleyin, dilimi ıslak bir kutuya (SIB-20F) düz bir şekilde koyun, gece boyunca 4 derecede inkübe edin . (Antikorun buharlaşmasını önlemek için ıslak kutunun altına az miktarda su ekleyin)

6. İlgili HRP etiketli ikincil antikoru ekleyin: Slayt, PBS'ye (G2156) yerleştirildi ve sarkaç çalkalayıcıda (SYC-Z100) her seferinde 5 dakika olmak üzere 3 kez yıkandı. Dilimler hafifçe kurutulduktan sonra, karşılık gelen birincil antikor türlerinin HRP'si ile etiketlenmiş ikincil antikorun kaplanmış dokusu halkaya eklendi ve oda sıcaklığında 50 dakika süreyle inkübe edildi.

7. iF488-TSA ekleyin: Slayt, PBS'ye (G2156) yerleştirildi ve sarkaç masasında (SYC-Z100) her seferinde 5 dakika olmak üzere 3 kez çalkalanarak yıkandı. Dilimler hafifçe kurutulduktan sonra hazırlanan iF488-TSA (G1231) çalışma sıvısı halkaya eklendi ve oda sıcaklığında ışıktan uzakta 10 dakika boyunca inkübe edildi. İnkübasyonun ardından slaytlar TBST'ye (G2150) yerleştirildi ve sarkaçlı çalkalayıcıda (SYC-Z100) her seferinde 5 dakika olmak üzere 3 kez yıkandı.

8. Antikor eluent tedavisi: Kesitler hafifçe kurutulduktan sonra, oda sıcaklığına getirilen antikor eluantı tüm dokuya yayıldı. Oda sıcaklığında 5 dakika inkübe edildikten sonra antikor elüenti çıkarıldı ve dokuyu tamamen kaplayacak şekilde yeterli miktarda antikor elüenti tekrar ilave edildi. 37 derecede 30 dakika inkübe edildikten sonra slayt TBST (G2150) içerisine yerleştirildi ve sarkaç masası (SYC-Z100) üzerinde 3 kez yıkandı. Her seferinde 5 dakika.

9. Serum bloklama: Kesit hafifçe kuruduktan sonra dokuya %3 BSA veya serum eklenir ve oda sıcaklığında 30 dakika süreyle kapatılır ve bloklama reaktifi, birincil ve ikincil antikor türlerine göre belirlenir.

10. İkinci bir birincil antikor ekleyin: Sızdırmazlık solüsyonunu yavaşça çalkalayın, birincil antikoru dilime belirli bir oranda ekleyin, dilimi ıslak bir kutuya (SIB-20F) düz bir şekilde koyun, gece boyunca 4 derecede inkübe edin . (Antikorun buharlaşmasını önlemek için ıslak kutunun altına az miktarda su ekleyin)

11. İlgili HRP etiketli ikincil antikoru ekleyin: Slayt, PBS'ye (G2156) yerleştirildi ve sarkaç çalkalayıcıda (SYC-Z100) her seferinde 5 dakika olmak üzere 3 kez yıkandı. Dilimler hafifçe kurutulduktan sonra, karşılık gelen birincil antikor türlerinin HRP'si ile etiketlenmiş ikincil antikorun kaplanmış dokusu halkaya eklendi ve oda sıcaklığında 50 dakika süreyle inkübe edildi.

12. iF555-TSA ekleyin: Slayt, PBS'ye (G2156) yerleştirildi ve sarkaç masası (SYC-Z100) üzerinde her seferinde 5 dakika olmak üzere 3 kez çalkalanarak yıkandı. Dilimler hafifçe kurutulduktan sonra hazırlanan iF555-TSA (G1233) çalışma sıvısı halkaya eklendi ve oda sıcaklığında ışıktan uzakta 10 dakika süreyle inkübe edildi. İnkübasyonun ardından slaytlar TBST'ye (G2150) yerleştirildi ve sarkaçlı çalkalayıcıda (SYC-Z100) her seferinde 5 dakika olmak üzere 3 kez yıkandı.

13. Antikor elüent tedavisi: Kesitler hafifçe kurutulduktan sonra, oda sıcaklığına getirilen antikor elüenti tüm dokuya yayıldı. Oda sıcaklığında 5 dakika inkübe edildikten sonra antikor elüenti çıkarıldı ve dokuyu tamamen kaplayacak şekilde yeterli miktarda antikor elüenti tekrar ilave edildi. 37 derecede 30 dakika inkübe edildikten sonra slayt TBST (G2150) içerisine yerleştirildi ve sarkaç masası (SYC-Z100) üzerinde 3 kez yıkandı. Her seferinde 5 dakika.

Not: 4-7 adımları, antikor etiketleme işleminin bir turudur; her antikor etiketleme turunda yalnızca farklı floresan etiketlemeyle (iF647-TSA G1232; iF594-TSA G1242) TSA reaktifinin değiştirilmesi gerekir. ; iF440-TSA G1250; iF546-TSA G1251; G1252; iF750-TSA G1258). Bir tur antikor etiketlemesinden sonra, antikor eluentini 30 dakika boyunca 37 derecede kuluçkaya yatırın, bu turda etiketlenen birincil ve ikincil antikorları çıkarın ve ardından antikor etiketlemenin bir sonraki turuna devam edin. Floresan çok etiketli antikorların sayısına bağlı olarak, tüm antikor etiketlemeleri tamamlanana kadar 4-7 adımlarını tekrarlayın.

14. DAPI tutucu çekirdekler: Kesitler hafifçe kurutulduktan sonra daireye DAPI boya çözeltisi (G1012) eklendi ve oda sıcaklığında, ışıktan uzakta 10 dakika inkübe edildi.

15. Otofloresan söndürme: Slayt PBS'ye (G2156) yerleştirildi ve sarkaç masasında (SYC-Z100) her seferinde 5 dakika olmak üzere 3 kez çalkalanarak yıkandı. Kesitler hafifçe kurutulduktan sonra halkaya doku kendi kendine floresans söndürücü (G1221-2) eklendi ve 5 dakika boyunca karanlıkta inkübe edildi ve daha sonra 10 dakika boyunca su altında durulandı.

16. Sızdırmazlık: Kesit hafifçe kurutulur ve anti-floresan söndürme sızdırmazlık tableti (G1401) ile kapatılır.

17. Mikroskobik fotoğraflama: Kesitler bir floresan mikroskobu altında görüntülenir ve görüntüler toplanır veya bir floresan tarayıcıyla taranır.

 

 

1. Antikor elüsyonunun etkisi kesit kalınlığına, elüsyon sıcaklığına ve elüsyon süresine bağlıdır. 4~8 μm'lik dilimler genellikle ıslak bir kutuda 37 derecede 30 dakika süreyle işlenir.

2. Antikor elüsyonu ve floresan çoklu etiket etiketlemenin etkisini sağlamak için, önce yapısal membran proteini ve hücre iskeleti proteininin, ardından sitoplazmik proteinin ve son olarak nükleer proteinin etiketlenmesi önerilir.

3. Bazı antikorların güçlü afinitesi varsa ve tamamen elüte edilmesi kolay değilse (beyin dokusu GFAP gibi), yıkama sıcaklığı 30 dakika süreyle 50 dereceye yükseltilebilir veya elüsyon sayısı, yani ilave edildikten sonra artırılabilir. antikor elüenti dokuya aktarılır ve 37 derecede 30 dakika inkübe edilir, antikor elüenti çıkarılır ve yeni bir antikor elüenti eklenir ve inkübasyon 37 derecede 30 dakika devam eder. dk.

4. Bu antikor elüsyon maddesi güçlü bir akışkanlığa sahiptir ve film yatay olarak yerleştirilmediğinde reaktifin halkadan dışarı akması kolaydır, bu da elüsyon etkisini etkiler. Çalışma sırasında bölümün düz durmasına dikkat etmek gerekir.

5. Cilt ve gözlerle teması önlemek için eldiven, maske ve laboratuvar önlüğü giyin. Hassas bölgelere temas halinde derhal bol su ile durulayın.

6. Son kullanma tarihi geçtikten sonra reaktifin titresi azalabilir, bu nedenle lütfen reaktifin son kullanma tarihi içinde kullanın.

 

Yalnızca Araştırma Kullanımı İçindir!

 

 

Popüler Etiketler: immün boyama antikor elüenti, Çin immün boyama antikor elüenti üreticileri, tedarikçiler, fabrika